与其它系统相比，哺乳动物细胞表达系统最大的优势在于能够指导蛋白的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能。因而表达产物在分子结构、理化性质和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白。虽然其操作复杂、产量低且培养成本高等，但仍然阻挡不了其作为获得高活性生物蛋白的首选方法，在某些情况下其表达产物的活性远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统。常规实验中使用最多的宿主细胞是HEK 293细胞和CHO细胞，前者一般用于重组蛋白的瞬时表达，用于在短时间内获得少量具有生物活性的重组蛋白;而后者一般用于重组蛋白的稳定表达，CHO细胞由于其遗传性状稳定、生长速度较快、能够耐受一定的剪切力及渗透压且具有和人类相似的糖基化修饰等优点，在工业生产和医疗方面发挥着重要的作用。

　　本公司提供HEK293细胞瞬时蛋白表达服务和CHO细胞稳定株构建服务，其中HEK 293细胞瞬时表达流程如下：

　　1 方案设计 - 分析目标基因序列，根据客户要求和已有文献报道做出实验方案本公司免费为客户提供：蛋白信号肽分析、蛋白疏水性分析、蛋白跨膜分析、糖基化位点预测、GPI功能锚定等;

　　2 重组质粒构建 1-2 周 选用合适的载体，合适的标签(eg:His,GST,Fc，SUMO)构建重组质粒，支持定点突变、载体改造、无缝克隆等服务;

　　3 细胞转染 1周 复苏并传代悬浮培养的HEK293细胞，大提重组质粒后，使用化学转染试剂将其转染入悬浮HEK293细胞;

　　4 重组蛋白的分离纯化 1周 选用合适的色谱方法分离纯化重组蛋白，并超滤换液至客户指定的缓冲液(如无特殊要求最终的保存缓冲液选择PBS或Tris-HCl)。较常用的色谱方法有：亲和层析(Ni、GST)、阴、阳离子交换层析(Q、SP)、分子排阻层析等;

　　5 重组蛋白的QC分析 1周 SDS-PAGE电泳检测重组蛋白纯度、BCA定量重组蛋白的浓度、Western-blot检测重组蛋白的免疫原性、

　　6 重组蛋白的再加工 1周 (可选，需额外收费)重组蛋白的过滤除菌、内毒素去除、标签切割等;

　　优势：本公司具有成熟、强悍的HEK 293瞬时表达系统，通过精准的蛋白结构预测并结合文献报道，表达过多种结构复杂的膜蛋白(如CD3、CD20、HER2、EGFR、CD19、PD-L1、VEGF165、CD105、EpCAM、FAP、GP73等)。结合本公司优秀的下游纯化工艺，本公司具备表达并纯化每升微克级重组蛋白的能力(如人钙受体蛋白：CasR，表达水平约200ug/L)。

　　其中CHO稳定细胞株构建流程如下：

　　1 方案设计 - 分析目标基因序列，根据客户要求和已有文献报道做出实验方案本公司免费为客户提供：蛋白信号肽分析、蛋白疏水性分析、蛋白跨膜分析、糖基化位点预测、GPI功能锚定等;

　　2 重组质粒构建 1-2 周 选用合适的载体，合适的标签构建重组质粒，支持定点突变、载体改造、无缝克隆等服务;

　　3 细胞转染 4-5周 复苏并传代悬浮培养的CHO细胞，大提重组质粒后，使用物理或化学方法将其转染入悬浮CHO细胞，通过选择培养基获得第一轮“Stable pool”;

　　4 高产细胞株筛选 3-5周 使用“有限稀释”的方法将第一轮“Stable pool”分散至96孔板使之形成单克隆，然后通过合适的方法(如ELISA、SDS-PAGE等)筛选高产细胞克隆;

　　5 高产细胞克隆的摇瓶测试 6-8周 使用摇瓶小量跟踪的方法进一步筛选高产细胞株，并对其传代稳定性做初步研究，此时有条件的可进行一次亚克隆;

　　6 重组蛋白的分离纯化 1-2周 (可选)选用合适的色谱方法分离纯化重组蛋白;

　　优势：本公司拥有强悍的工业化CHO GS表达系统(即“谷氨酰胺合成酶筛选系统”)，通过此筛选系统构建的CHO抗体稳定细胞株表达水可达500 mg-1000 mg/L。