杆状病毒-昆虫细胞蛋白表达服务项目:

  病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)自1983年问世以来(Smith & Summer,1983;Maeda et al 1984),由于其具有高效的表达能力、安全,易操作等特点,已成为研究和生产各种原核、真核蛋白的有力而普及的工具,已成功表达了大量的外源基因,几乎覆盖了所有物种可开发利用的大部分基因。


  1 方案设计 - 分析目标基因序列,根据客户要求和已有文献报道做出实验方案本公司可免费为客户提供:pFastbacⅠ胞内表达载体以及本公司自我改造的pFast-gp67和pFast-HBM分泌表达载体;


  2 重组供体质粒的构建 1-2 周 选用合适的载体,合适的标签(eg:His,GST,Fc,SUMO)构建重组供体质粒“pfastbacⅠ-target”(target代表目标基因);


  3 重组杆粒的制备 1周 转化重组供体质粒至DH10bac感受态细胞,蓝白斑筛选阳性克隆并使用PCR反复鉴定,最后碱裂解小提重组杆粒;


  4 细胞转染 1周 复苏并传代悬浮培养的SF21细胞,使用化学转染试剂将重组杆粒转染入SF21细胞以制备P1代重组杆状病毒;


  5 重组蛋白的表达 1周 利用P1代杆状病毒制备P2代病毒、利用P2代病毒侵染大规模培养的SF21细胞以表达重组蛋白;


  6 重组蛋白的分离纯化及QC检测 1周 选用合适的色谱方法(eg:亲和、离子、大小排阻等)分离纯化重组蛋白,并超滤换液至客户指定的缓冲液(如无特殊要求最终的保存缓冲液选择PBS或Tris-HCl)。QC检测包括:SDS-PAGE电泳检测重组蛋白纯度、BCA定量重组蛋白的浓度、Western-blot检测重组蛋白的免疫原性。

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