CRISPR-Cas系统是细菌和古细菌为了防御病毒、噬菌体等外来核酸而在长期的进化过程中形成的获得性免疫系统。CRISPR-Cas 系统根据效应因子的数量分为Class I和Class II:Class I存在于细菌和古细菌中,可分为types I, III, and IV,包含由4-7个cas蛋白亚基组成的效应因子;Class II(存在于细菌中,可分为type II, V, and VI,,包含由单个cas蛋白亚基组成的效应因子。CRISPR-Cas13a (又称为C2c2蛋白 )属于Class II 中的type VI。
Cas13a包含两个高级真核和原核核苷酸结合(HEPN)结构域,该结构域可高效地降解几乎所有的单链RNA。Cas13a在crRNA介导的下,可以特异性地切割靶标RNA。Cas13a可用于活细胞RNA的调控、RNA基因编辑。Cas13a蛋白还具有旁切活性 (collateral activity),即在高度特异性的靶标识别后,其非特异性的RNA切割活性被激活。由于对靶标RNA的特异性识别和切割活性,以及特异性靶标识别后被激活的旁切活性,CRISPR-Cas13a系统可应用于RNA和DNA的检测,如:与淬灭荧光报告基团探针结合,用于荧光检测;与荧光标记的报告基团结合,用于凝胶检测;与抗原标记的报告分子结合,用于层析试纸条检测。Cas13a切割靶标ssRNA需要特定 5’-A/U/C-3’的PFS(protospacer flanking sequence)。LwaCas13a的crRNA的序列为:5’-GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAAC(直接重复区,长度36nt)NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN(靶标结合区,长度25-35nt)-3’。
北京爱必信生物提供基因重组表达的Cas13a蛋白,活性高,稳定性好。
货号:Abt-P-6003
剂型:液体或冻干粉
保存缓冲液:10 mM Tris,300 mM NaCl,0.5 mM DTT,10% 甘油,pH7.4 .
分子量: 130 KDa左右(SDS-PAGE检测)
纯度:≥90%(SDS-PAGE检测 )
来源:LwaCas13a来源于Leptotrichia wadei ,通过E. coli重组表达。
保存条件:长期储存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反复冻融。
运输条件: 低温冰袋
特征与应用:体外切割 RNA,可用于核酸RNA的高灵敏度、特异性、快速检测;用于活细胞RNA的调控、RNA基因编辑。
使用注意事项:使用过程中应该避免RNA酶污染;根据使用次数进行分装,避免反复冻融。
热失活:65°C,10 min。
安全提示:本试剂仅用于研发或生产,严禁用于人体或动物实验